АННОТАЦИЯ
Введение: В данном рандомизированном клиническом исследовании сравнивали антибактериальный эффект ирригации 2,5%-ным гипохлоритом натрия (NaOCl) или 2%-ным хлоргексидином (ХГ) при обработке инфицированных корневых каналов ротационными никель-титановыми инструментами.
Методы: Корневые каналы 50-ти однокорневых зубов с апикальным периодонтитом обрабатывали ротационными инструментами BioRaCe (FKG Dentaire, Ла-Шо-де-Фон, Швейцария) с ирригацией 2,5%-ным NaOCl (n = 25) или 2%-ным ХГ (n = 25). Пробы из канала брали в начале (S1) и после (S2) химико-механической обработки. Из клинических образцов выделяли ДНК и оценивали снижение общего уровня бактерий и уровня стрептококков с помощью количественной полимеразной цепной реакции на основе гена 16S рибосомной РНК.
Результаты: Все образцы S1 были положительными в анализе на присутствие бактерий. После химико-механической обработки с применением 2,5% NaOCl или 2% ХГ в 44% и 40% корневых каналов соответственно все еще обнаруживались бактерии. Что касается общего количества бактерий, в образцах S1 из группы NaOCl среднее количество эквивалентов бактериальных клеток составляло 3,7 × 105 со значительным снижением в образцах S2 до среднего значения 5,49 × 102 эквивалентов клеток (P <0,001). В группе ХГ средняя бактериальная нагрузка в образцах S1 составляла 8,77 × 104 клеточных эквивалентов со значительным снижением в образцах S2 в среднем до 2,81 × 103 клеток (P <0,001). Различия как в наличии/отсутствии, так и в количественных данных не были статистически значимыми (P > 0,05). Оба протокола ирригации были очень эффективными в снижении уровня видов Streptococcus (P <0,001).
Выводы: Не наблюдалось существенных различий в клинической антибактериальной эффективности обработки ротационными инструментами с орошением 2,5%-ным NaOCl или 2%-ным ХГ в качестве основного ирриганта. (J Endod 2016;42:943–947)
Надлежащий контроль инфекции корневого канала имеет решающее значение для оптимального результата лечения. Стерильности системы корневых каналов практически невозможно достичь с помощью современных инструментов, веществ и методов; таким образом, главная реалистичная микробиологическая цель эндодонтического лечения заключается в сокращении внутриканальных популяций бактерий до уровней, совместимых с заживлением перирадикулярной ткани. Химико-механическая обработка играет существенную роль в снижении бактериальной нагрузки в основном корневом канале, который является областью системы, содержащей наибольшее количество бактерий. Механическое воздействие инструментов и потоки ирригантов удаляют большое количество бактерий, но для оптимизации дезинфекции требуется использование антимикробного ирригационного раствора.
В течение многих лет гипохлорит натрия (NaOCl) был наиболее часто используемым эндодонтическим ирригантом. Его широкое признание среди врачей связано с его высокими антибактериальными и гистолитическими способностями. Тем не менее, NaOCl имеет некоторые недостатки, в том числе токсичность для тканей и развитие серьезных осложнений при апикальной экструзии. Это побудило к поиску альтернативных ирригантов, таких как хлоргексидин (ХГ). ХГ не обладает гистолитической способностью, но отличается хорошей антибактериальной активностью в отношении бактерий полости рта и обладает свойством субстантивности, что может обеспечить длительный антибактериальный эффект. Во многих исследованиях in vitro/ex vivo сравнивали антибактериальные свойства NaOCl и ХГ; в некоторых сообщалось, что NaOCl превосходит ХГ, в некоторых - что ХГ превосходит NaOCl, а в некоторых - об их эквивалентности. Что касается клинических исследований, сравнительные данные являются скудными, а также неубедительными, что четко продемонстрировано в недавнем систематическом обзоре. Среди исследований с использованием культивирования в качестве метода микробиологического анализа в двух сообщалось, что NaOCl превосходит ХГ, а в двух других не было показано существенных различий между ними.
Среди молекулярных исследований по сравнению клинических антибактериальных эффектов этих двух веществ одно не показало существенных различий, тогда как в других продемонстрировано, что NaOCl превосходит ХГ. Во всех этих предыдущих клинических исследованиях использовали ручные инструменты, и до сих пор ни в одном исследовании не сравнивали антибактериальную эффективность NaOCl и ХГ в качестве ирригантов при использовании современных ротационных никель-титановых инструментов.
Данное клиническое исследование было проведено для сравнения антибактериальной эффективности 2,5%-го раствора NaOCl и 2%-го раствора ХГ, используемых в качестве ирригантов при химико-механической обработке инфицированных корневых каналов, связанных с первичными поражениями апикального периодонтита. Каналы обрабатывали с помощью ротационных никель-титановых инструментов, и снижение общих уровней бактерий и уровней стрептококков оценивали с помощью культурально-независимого количественного молекулярного микробиологического анализа.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Субъекты
Исследуемая популяция состояла из лиц, посещающих эндодонтическую клинику стоматологического факультета университета Эстасио-де-Са, Рио-де-Жанейро, Рио-де-Жанейро, Бразилия, для обследования и лечения апикального периодонтита с марта 2009 года по декабрь 2010 года. В исследование были включены только зубы с одним корнем и одним каналом, имеющие кариозные поражения, некротические пульпы, подтвержденные тестами жизнеспособности пульпы, а также клинические и рентгенологические признаки бессимптомного апикального периодонтита. Критерии исключения: сильное разрушение коронки зуба кариесом, перелом корня или коронки, предшествующее эндодонтическое лечение, симптомные зубы, наличие глубоких периодонтальных карманов (> 4 мм) и пациенты, получавшие лечение антибиотиками в течение предшествующих 3 месяцев. Протокол исследования был одобрен Комитетом по этике Университета Эстасио-де-Са, и от всех пациентов или их родителей было получено информированное согласие.
Расчет размера выборки и рандомизация
В данном исследовании основным критерием сравнения было снижение количества бактерий благодаря использованию NaOCl либо ХГ в качестве ирриганта. Поэтому расчет размера выборки основывался на этом параметре. При помощи программного обеспечения STATISTICA версии 8.0 (StatSoft, Талса, Оклахома), расчет размера выборки показал, что не менее 21 зуба на группу будет достаточно, чтобы продемонстрировать разницу в 5% в количестве бактерий при мощности 90%. Поэтому зубы были распределены на 2 группы методом случайного выбора по 25 в каждой в зависимости от типа используемого ирриганта: 2,5% NaOCl или 2% ХГ. Рандомизация с равным распределением долей была получена путем жеребьевки. Не представлялось возможным выполнить маскировку вида лечения для пациента и лечащего врача вследствие узнаваемого запаха NaOCl.
Методы лечения и отбора проб
Образцы из корневых каналов отбирали в условиях строгой дезинфекции. Кариес и дефектные коронковые реставрации удаляли стерильными высокоскоростными и низкоскоростными борами. Затем коронки зубов очищали пемзой и изолировали резиновыми прокладками. Зуб и окружающее поле дезинфицировали согласно протоколу с использованием 3%-ной перекиси водорода с последующим орошением 2,5%-ным раствором NaOCl. После завершения формирования доступа с помощью другого стерильного бора с орошением стерильным физиологическим раствором операционное поле, включая камеру пульпы, снова дезинфицировали. NaOCl на поверхностях зубов инактивировали стерильным 5%-ным тиосульфатом натрия. Перед отбором проб из корневого канала из полостно-поверхностного угла полости доступа отбирали образцы для контроля стерильности при помощи стерильных бумажных штифтов. Для включения в исследование у всех зубов образцы контроля стерильности должны были быть отрицательными в анализе полимеразной цепной реакции (ПЦР) с универсальными праймерами на основе гена 16S рибосомной РНК (рРНК). Три пациента были исключены из эксперимента и заменены тремя новыми субъектами в соответствии с критериями включения/исключения и процессом рандомизации.
Исходные образцы (S1) отбирали из корневого канала следующим образом. В канал осторожно помещали стерильный физиологический раствор, не допуская переполнения, и вводили стерильный ручной K-файл №15 на глубину приблизительно 1 мм не доходя до верхушки корня, определенной при помощи диагностической рентгенограммы. После совершения легкого опиливающего движения стерильные бумажные штифты по очереди помещали в канал на ту же глубину и использовали для впитывания жидкости, находящейся в канале. Каждый бумажный штифт оставляли в канале не менее чем на 1 минуту, и общее количество использованных штифтов было достаточным для высушивания канала. В асептических условиях бумажные штифты переносили в крипробирки, содержащие буфер Трис-ЭДТА (10 ммоль/л Трис-HCl, 1 ммоль/л ЭДТА, рН = 7,6), и немедленно замораживали при температуре -20 ºC.
Химико-механическую обработку завершали при том же посещении. После ирригации канала с применением 1 мл 2,5% NaOCl или 2% ХГ, с помощью электронного апекс-локатора (Novapex; Forum Technologies, Ришон-ле-Цион, Израиль) определяли рабочую длину на расстоянии 1 мм от апикального отверстия и подтверждали с помощью рентгенограммы. Сначала канал увеличивали, а апикальную проходимость обеспечивали с помощью ручного файла K-типа № 20. Обработку выполняли с использованием инструментов BioRaCe (FKG Dentaire, Ла-Шо-де-Фон, Швейцария). Размеры основных апикальных файлов, используемых для обработки верхушки, варьировались от BR5 (40/0,04) до BR7 (60/0,02). На протяжении всей процедуры проходимость апикального отверстия проверяли при помощи небольших ручных файлов. Ирригацию с применением NaOCl или ХГ выполняли в ходе внутриканальных процедур с использованием одноразовых шприцев и игл NaviTip (Ultradent, Саут-Джордан, Юта), введенных на глубину, не доходящую на 3 мм до рабочей длины. В общей сложности использовали 15 мл любого из ирригантов на канал.
После обработки корневой канал высушивали, а затем промывали 5 мл 10%-ного раствора тиосульфата натрия или смеси 0,07% лецитина, 0,5% Tween 80 (Sigma Aldrich, Сан-Паулу, Сан-Паулу, Бразилия) и 5% тиосульфата натрия для нейтрализации любого остаточного NaOCl или ХГ соответственно. После обработки отбирали образцы (S2) из корневых каналов, как описано ранее.
Смазанный слой удаляли, а канал сушили бумажными штифтами и обрабатывали пастой на основе гидроксида кальция. Через неделю корневой канал заполняли гуттаперчей и пломбировочным материалом методом бокового уплотнения.
Количественный анализ ПЦР в режиме реального времени
Образцы оттаивали до комнатной температуры и экстрагировали ДНК с использованием мини-набора QIAamp DNA (Qiagen, Валенсия, Калифорния), следуя указаниям производителя. Уровни общего количества бактерий и видов Streptococcus определяли количественно до и после химико-механической обработки методом количественной ПЦР в режиме реального времени (кПЦР) на основе гена 16S рРНК с помощью мастер-микса Power SYBR Green PCR (Applied Biosystems, Фостер-Сити, Калифорния) на ПЦР-анализаторе в режиме реального времени ABI 7500 (Applied Biosystems). Общий объем реакционной смеси составлял 20 мкл; праймеры, условия цикла, построение стандартной кривой, контрольные пробы и анализ данных были выполнены как описано ранее. Чувствительность кПЦР была установлена на уровне 102 эквивалентов бактериальных клеток. Данные представлены в виде количества клеточных эквивалентов на образец. Все измерения проводили в трех экземплярах для образцов, стандартов и контрольных проб.
Статистический анализ
Количественные данные из кПЦР для общего количества бактерий и для стрептококков анализировали следующим образом. Уменьшение количества бактерий в пределах группы оценивали, сравнивая образцы S1 и S2 с применением критерия Уилкоксона для связных выборок. Образцы S1 сравнивали между группами с помощью непараметрического U-критерия Манна-Уитни, который не показал статистически значимой разницы (P > 0,05). Поэтому для сравнений между группами использовали абсолютные значения в образцах S2 с применением U-критерия Манна-Уитни. Данные о наличии/отсутствии бактерий в образцах S2 из 2 групп сравнивали с использованием точного критерия Фишера. Уровень значимости был установлен на Р < 0,05 для всех сравнений.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Среди 50 человек, включенных в исследование, было 27 мужчин и 23 женщины; средний возраст составлял 29 лет (диапазон 13–52 года). Все они отрицали наличие значимых системных заболеваний. У каждого пациента лечили 1 зуб.
Бактерии были обнаружены во всех образцах, взятых перед обработкой, что было выявлено с помощью кПЦР с универсальными праймерами на основе гена 16S рРНК. После химико-механической обработки ротационными инструментами и ирригации с применением 2,5% NaOCl или 2% ХГ, в 44% и 40% корневых каналов соответственно все еще обнаруживались бактерии. Эта разница в наличии/отсутствии бактерий не была статистически значимой (P > 0,05).